Kit qLUMEN One-Step per RT-qPCR con Colorante Verde – per analisi RNA in tempo reale

Il Kit qLUMEN One-Step per RT-qPCR con colorante verde è una soluzione pronta e ottimizzata per eseguire trascrizione inversa e PCR quantitativa in tempo reale in un’unica provetta, partendo da campioni di RNA.

È indicato per laboratori di biologia molecolare, genetica, microbiologia molecolare, virologia, biotecnologie, ricerca universitaria, controllo qualità e diagnostica molecolare che necessitano di un workflow rapido, sensibile e riproducibile per l’analisi di target RNA.

Il kit consente di convertire l’RNA in cDNA e amplificare il target mediante qPCR nello stesso tubo di reazione, riducendo i passaggi manuali, i tempi operativi e il rischio di contaminazione. Il sistema utilizza un colorante verde fluorescente per monitorare l’amplificazione in tempo reale, rendendolo adatto a saggi di espressione genica, analisi comparative, screening molecolari e validazione di primer.

RT-qPCR One-Step: retrotrascrizione e qPCR nello stesso tubo

La tecnologia RT-qPCR one-step permette di eseguire in una sola reazione due fasi fondamentali:

• la trascrizione inversa dell’RNA in cDNA;
• la successiva amplificazione quantitativa in tempo reale tramite qPCR.

Rispetto ai protocolli two-step, in cui la sintesi del cDNA e la qPCR vengono eseguite separatamente, il formato one-step semplifica il lavoro e riduce le manipolazioni del campione.

Questo è particolarmente utile quando si lavora con RNA, una molecola delicata e facilmente degradabile. Meno aperture di provette, meno pipettaggi e meno passaggi intermedi significano un workflow più pulito e meno occasioni per fare casino. E con l’RNA, diciamolo, il casino arriva già abbastanza da solo.

MasterMix 2X per PCR real-time con colorante verde

Il kit comprende un MasterMix fornito a concentrazione 2X per realizzare PCR in tempo reale utilizzando un colorante verde.

Il colorante verde si lega al DNA a doppio filamento prodotto durante la reazione. Man mano che l’amplificazione procede, aumenta il segnale fluorescente rilevato dallo strumento real-time PCR.

Questa tecnologia è particolarmente pratica perché non richiede la progettazione di una sonda specifica: il laboratorio deve aggiungere i primer specifici per il target e il modello RNA, seguendo il protocollo previsto.

Miscela RT con componenti per retrotrascrizione e protezione dell’RNA

Il kit include anche una miscela RT contenente una combinazione equilibrata di componenti per la retrotrascrizione e inibitori di RNasi.

Questa caratteristica è molto importante perché l’RNA è sensibile alla degradazione enzimatica. La presenza di componenti dedicati alla fase RT e alla protezione dall’attività RNasica aiuta a preservare il campione durante la reazione e a migliorare l’affidabilità del risultato.

In pratica, il kit non si limita a “fare qPCR”, ma integra anche la parte critica della conversione RNA → cDNA.

Ideale per analisi di espressione genica

Il Kit qLUMEN One-Step con colorante verde è particolarmente indicato per applicazioni di analisi di espressione genica, dove si parte da RNA e si vuole quantificare un target specifico mediante real-time PCR.

Può essere utilizzato per confrontare livelli di espressione tra campioni diversi, condizioni sperimentali, trattamenti, tempi di incubazione o modelli biologici differenti.

La tecnologia con colorante verde è molto pratica nella fase di sviluppo e validazione dei saggi, perché consente di lavorare con coppie di primer senza dover progettare una sonda fluorescente dedicata.

Importanza della curva di melting

Nelle qPCR basate su colorante verde, è importante verificare la specificità dell’amplificazione tramite curva di melting.

Il colorante verde rileva il DNA a doppio filamento prodotto durante la reazione, ma non distingue da solo tra amplicone specifico, primer-dimer o prodotti aspecifici. Per questo motivo, la curva di melting è fondamentale per controllare che il segnale derivi da un prodotto corretto e ben definito.

In parole povere: il colorante verde è comodo e versatile, ma la melting curve è il buttafuori all’ingresso. Controlla che alla festa sia entrato l’amplicone giusto, non gente a caso.

Disponibile con ROX™ alto e ROX™ basso

Il kit è disponibile in due versioni, entrambe per 100 test/reazioni:

La scelta tra ROX™ alto e ROX™ basso dipende dallo strumento real-time PCR utilizzato. Il ROX viene impiegato come riferimento passivo da diverse piattaforme qPCR per normalizzare variazioni di fluorescenza non legate all’amplificazione.

Differenza tra RT-qPCR con colorante verde e RT-qPCR con sonda

Il kit con colorante verde è più versatile e immediato, perché richiede soltanto primer specifici e modello RNA. È particolarmente utile per analisi di espressione genica, validazione primer, screening e saggi in cui si desidera una soluzione rapida da impostare.

Il kit con sonda, invece, offre una specificità maggiore, perché il segnale fluorescente dipende anche dal legame della sonda alla sequenza target. È preferibile quando serve una discriminazione più selettiva, ad esempio in saggi diagnostici o target particolarmente complessi.

In sintesi:

Applicazioni principali

Il Kit qLUMEN One-Step per RT-qPCR con colorante verde è indicato per:

• RT-qPCR one-step;
• real-time PCR da RNA;
• sintesi di cDNA e qPCR nello stesso tubo;
• analisi di espressione genica;
• quantificazione relativa di target RNA;
• validazione di primer;
• screening molecolare;
• microbiologia molecolare;
• virologia molecolare;
• genetica molecolare;
• ricerca universitaria;
• biotecnologie;
• controllo qualità;
• diagnostica molecolare secondo protocollo interno.

Caratteristiche tecniche principali

Perché scegliere il Kit qLUMEN One-Step per RT-qPCR con colorante verde

Il Kit qLUMEN One-Step per RT-qPCR con colorante verde è una scelta ideale per laboratori che cercano una soluzione pratica, rapida e versatile per analisi quantitative a partire da RNA.

I principali vantaggi sono:

• consente retrotrascrizione e qPCR nello stesso tubo;
• riduce tempi e manipolazioni;
• diminuisce il rischio di contaminazione;
• utilizza colorante verde per PCR real-time;
• non richiede una sonda specifica;
• include MasterMix 2X per qPCR;
• include miscela RT con componenti per retrotrascrizione e inibitori di RNasi;
• disponibile con ROX™ alto o ROX™ basso;
• formato da 100 test;
• indicato per analisi di espressione genica, screening e validazione primer.

Rispetto a una RT-qPCR two-step, questo kit permette di semplificare il workflow. Rispetto alla versione con sonda, offre maggiore immediatezza e flessibilità, soprattutto quando si lavora su più target o in fase di sviluppo del metodo.